上海千实：紫外分析仪的原理及其应用

紫外分析仪是荧光技术的应用，荧光技术是什么呢? 首先了解一下什么是荧光，荧光又作"萤光"，是指一种光致发光的冷发光现象。

当某种常温物质经某种波长的入射光(通常是紫外线或X射线)照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发出比入射光的的波长长的出射光(通常波长在可见光波段);而且一旦停止入射光，发光现象也随之立即消失。

具有这种性质的出射光就被称之为荧光。知道了什么是荧光，顾名思义就能想到什么是荧光技术。

荧光技术是某些物质受一定波长的光激发后，在极短时间内(10-8秒)会发射出波长大于激发波长的光，这种光称为荧光。这一发光现象在各方面的应用及有关的方法称为荧光技术(fluorescent technique)。

物质经过紫外线照射后发出荧光的现象可分为两种情况，种是自发荧光，如叶绿素、血红素等经紫外线照射后，能发出红色的荧光，称为自发荧光;第二种是诱发荧光，即物体经荧光染料染色后再通过紫外线照射发出荧光，称为诱发荧光。

荧光技术在生物化学及分子生物学研究中应用主要包括以下几个方面:

1、物质的定性:不同的荧光物质有不同的激发光谱和发射光谱，因此可用荧光进行物质的鉴别。与吸收光谱法相比，荧光法具有更高的选择性。

2、定量测定:利用在较低浓度下荧光强度与样品浓度成正比这一关系可以定量分析样品中荧光组分的含量，常用于测定氨基酸、蛋白质、核酸的含量。

荧光定量测定的一个优点是灵敏度高，例如维生素B2的测定限量可达1毫微克/毫升，这一优点使测定时所需要样品量大大减少。

这种定量测定方法还可应用于酶催化的反应，只要反应前后有荧光强度的变化，就可用来测定酶的含量及酶反应的速率等。

3、研究生物大分子的物理化学特性及其分子的结构和构象:荧光的激发光谱、发射光谱、量子产率和荧光寿命等参数不仅和分子内荧光发色基团的本身结构有关，而且还强烈地依赖于发色团周围的环境，即对周围环境十分敏感。

利用此特点可通过测定上述有关荧光参数的变化来研究荧光发色团所在部位的微环境的特征及其变化。

在此研究中，除了利用生物大分子本身具有的荧光发色团(如色氨酸、酪氨酸、鸟苷酸等，此类荧光称为内源荧光)以外，可将一些特殊的荧光染料分子共价地结合或吸附在生物大分子的某一部位，通过测定该染料分子的荧光特性变化来研究生物大分子，这种染料分子被称为"荧光探针"，它们发出的荧光一般称为外源荧光。

荧光探针的应用，大大地开拓了荧光技术在分子生物学中的应用范围。

4、利用荧光寿命、量子产率等参数可以研究生物大分子中的能量转移现象:通过该现象的研究，可以获得生物大分子内部的许多信息。

2023-05-22 00:00